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診斷

發(fā)布時(shí)間:2005-07-07 信息來(lái)源: 點(diǎn)擊量:
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  1.臨診診斷:(1)高致病性禽流感:爆發(fā)時(shí)家禽大批急性死亡,,產(chǎn)蛋停止,,呼吸道癥狀,頭部,、顏面部和頸部浮腫,,無(wú)毛部皮膚(冠肉髯、腳部)發(fā)紺,、腫,、出血、壞死,,白綠色下痢,。(2)低致病性禽流感:無(wú)癥狀急性感染,死亡率為5%~15%,,產(chǎn)蛋率下降5%~50%,,呼吸道病變、氣管水腫,、干酪樣滲出物,、氣囊炎,腎臟腫大,、尿酸鹽沉著,。
僅根據(jù)臨診癥狀及剖檢病變,很難確診,必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷,。
    2.實(shí)驗(yàn)室診斷:(1)病毒分離:采取喉頭,、氣管、肺,、氣囊、肝,、脾,、腦及直腸內(nèi)容物等,置于加有青霉素10000單位/毫升,,鏈霉素10000單位/毫升組織培養(yǎng)液或50%葡萄糖磷酸鹽緩沖液中4℃保存或運(yùn)輸,,不超過(guò)48小時(shí)。用上述溶液將病料制成10%乳劑-70℃保存或3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,,取上清液用0.2~0.45微米(220~450納米)的濾膜過(guò)濾除菌,,取濾液0.3毫升,尿囊腔接種9~11日齡SPF雞胚,,每份樣品至少接種5個(gè)雞胚,。經(jīng)37℃孵化4天(剔除接種后24小時(shí)內(nèi)死亡雞胚),置于4℃ 6~12小時(shí)殺死雞胚,,吸取尿囊液,,同時(shí)采取絨毛尿囊膜。尿囊液中若含有AIV時(shí),,HA試驗(yàn)呈陽(yáng)性,。若初代尿囊液HA試驗(yàn)呈陰性,需再傳一代,,取尿囊液1:10稀釋接種0.3毫升/胚,,再呈陰性則判斷為AIV感染陰性反應(yīng);若呈陽(yáng)性,,用ND抗血清進(jìn)行HI試驗(yàn),,若呈陰性反應(yīng)時(shí)再結(jié)合以下血清學(xué)診斷可初步判定為AIV感染。(2)血清學(xué)診斷:利用AGP,、ELISA方法可檢測(cè)A型流感病毒共有的特異性抗體或抗原,,已鑒定的標(biāo)準(zhǔn)AIV制備的抗原可用檢測(cè)可疑雞群的血清抗體(此步驟可在病毒分離前進(jìn)行)。將上述病毒分離時(shí)采用的雞胚尿囊膜用PBS(pH=7.2)洗凈,,排盡囊中液體,,研磨乳劑,反復(fù)凍融3次,,3000轉(zhuǎn)/分,,離心10分鐘,取上清液,用終濃度0.1%的福爾馬林經(jīng)37℃36小時(shí)滅活,,即可用作AGP抗原(3個(gè)膜可制做約1毫升抗原),。用已知的標(biāo)準(zhǔn)抗血清與其進(jìn)行AGP試驗(yàn),鑒定分離病毒,。(3)病毒定型及定性:(H和N亞型):確定亞型需用已定型(H1~H5,,N1~N9)的一系列單特異性抗血清做HI試驗(yàn),因此應(yīng)交專門機(jī)構(gòu)進(jìn)行,。(4)致病性(毒力)的測(cè)定:HPAIV的判定標(biāo)準(zhǔn)(美國(guó)家畜衛(wèi)生協(xié)會(huì)),。
     ①取1:10稀釋的感染尿囊液0.2毫升靜脈接種8只4~8周齡SPF雞,隔離飼養(yǎng)10天內(nèi)死亡6只或6只以上(致死率75%以上),。
    ②致死率1~5/8(75%以下),,H5或H7亞型以外的病毒,在不加胰蛋白酶細(xì)胞培養(yǎng)中可增殖,,并可形成CPE或蝕斑,。
    此外,也可測(cè)定ICPI(腦內(nèi)接種致死指數(shù))來(lái)判定致病性,,出雛40小時(shí)SPF初生雛10只,,腦內(nèi)接種10個(gè)病毒,7天內(nèi)觀察記錄死亡情況,,測(cè)定ICPI值,,在1.5~2.0者可判定為HPAIV。
   (5)基因診斷:利用基因擴(kuò)增(PCR)方法直接檢出病毒的基因,,此方法較常規(guī)的病毒分離法速度快,,特異性高,而且可克服因野外取料混有其他病毒造成的誤診,。
一旦經(jīng)病毒分離,、血清學(xué)試驗(yàn)初步診斷為AI時(shí),應(yīng)立即報(bào)告國(guó)家有關(guān)獸醫(yī)機(jī)構(gòu),,并將分離的病毒或采集的病料報(bào)國(guó)家指定的機(jī)構(gòu)進(jìn)行確診和定位,。診斷過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行防污染、防擴(kuò)散的操作程序,。

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